【文献速递】一文读懂CRISPR脱靶效应和脱靶检测
1、CRISPR脱靶效应指基因组中除预期靶点外，由核酸酶诱导的DNA切割事件，可通过实验与生物信息学工具结合的策略进行评估，常用实验工具包括GUIDE-seq、Amp-NGS等，生物信息学工具则涉及定位与评分排序两步骤，不同技术工具在灵敏度、特异性等方面各有优劣。
2、图 CD5敲除与PD-1敲除CART治疗的效果比较研究方法与工具CRISPR-Cas9技术：研究人员使用Aldevron SpyFi Cas9核酸酶和IDT的Alt-R sgRNA敲除CD5。Aldevron SpyFi Cas9表现出更高的编辑效率和更低的脱靶效应，CD5-gRNA（sgRNA #4）的敲除效率达90%以上。
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慢病毒敲除/敲降基因
1、慢病毒敲除/敲降基因主要通过两种技术实现：CRISPR-Cas9技术和RNA干扰技术。以下是对这两种技术的详细阐述：利用CRISPR-Cas9技术敲除基因原理：CRISPR-Cas9技术利用Cas9核酸酶和特定的导向RNA（gRNA）来定位并切割目标基因的DNA序列，从而实现基因的敲除。
2、慢病毒敲除/敲降基因主要通过两种技术实现：CRISPR-Cas9技术和RNA干扰技术。以下是对这两种技术的详细阐述：利用CRISPR-Cas9技术敲除基因CRISPR-Cas9技术是一种高效的基因编辑工具，它利用Cas9核酸酶和特定的导向RNA（gRNA）来定位并切割目标DNA序列，从而实现基因的敲除。
3、“三合一”慢病毒家族通过整合基因敲除（KO）、敲低/沉默（CRISPRi）和过表达/激活（CRISPRa）三大功能，以单病毒液替代传统多病毒转染，显著提升细胞基因编辑效率，同时降低成本与实验周期。